应用差异显示技术从高低转移癌系克隆出肿瘤转移相关基因G3BP

• 作者: 刘宇欣 吴秉铨 崔湘琳 方伟岗 王洁良 由江峰 郑杰
• 来源期刊: 中华医学杂志(英文版)
• 学科: 医学
• 关键词: 前列腺癌肿瘤转移转移潜能差异显示 G3BP GAP
• 年，卷（期）: 2001,（1）
• 所属期刊栏目: ORIGINAL ARTICLES
• 页码范围: 35-38
• 页数: 5页
• 分类号: R73
• 字数: 1248字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3760/j.issn:0366-6999.2001.01.007

摘要

目的克隆肿瘤转移相关基因。 方法应用倍比稀释法对人肺巨细胞癌PG进行单细胞克隆，并应用裸鼠异种接种及自发性转移体内实验对各亚系的转移潜能进行鉴定。以具有不同转移潜能的癌细胞亚系为研究对象，应用mRNA差异显示技术克隆差异片段, sanger双脱氧末端终止法测序及自动双向测序获得其碱基序列, 与GenBank数据库进行同源性比较。在两组具有不同转移潜能的癌细胞亚系（人肺癌，前列腺癌）中Northern杂交验证表达差异。 结果两个具有不同转移潜能的亚系BE1和LH7，在完全相同的遗传背景下，亚系BE1在裸鼠体内100%成瘤，100%转移；亚系LH7在裸鼠体内100%成瘤，无一例转移。二者转移表型的显著差异必然反映了转移相关基因表达与调控的差异。因此该系统是mRNA差异显示的良好模型。应用mRNA差异显示技术克隆差异片段, 一个849?bp片段在高转移亚系BE1中低表达，而在不转移亚系LH7高表达，二者差异显著，在重复实验中得到了验证。成功的回收该片段，连接入pGEM-T载体，经sanger双脱氧末端终止法测序及自动双向测序获得其碱基序列,经GenBank Blastn检索，与G3BP（U32519）同源性高达99%。Northern杂交显示G3BP在LH7高表达（约3.3?kb），而在BE1中低表达，验证了差异显示的结果，排除了假阳性的可能性。为了进一步探讨这一规律,我们引入了另一组来自人前列腺癌PC-3M的具有不同转移潜能的亚系(我室建立)：亚系1E8在裸鼠体内转移率100%，亚系2B4在裸鼠体内转移率0。Northern杂交显示G3BP在高转移亚系1E8中表达显著低于不转移亚系2B4，符合上述规律,即G3BP的表达降低与高转移潜能具有相关性。G3BP由法国Rhone-Poulenc Rorer实验室于1996年克隆，在血清刺激的而非静止状态的中国仓鼠肺成纤维细胞中，G3BP与GAP-SH3功能区牢固结合， G3BP 具有DNA/RNA解旋能力以及内源性核糖核酸酶（RNase）活性，G3BP可在多个位点断裂c-myc mRNA的3’非编码区，导致c-myc mRNA的降解。通过G3BP 将RNA的稳定性与上游Ras信号传导通路联系起来，为我们勾划出一个新的Ras信号传导通路:Ras可能通过GAP和G3BP控制新合成的mRNA的稳定性来传导信号。基于其所处的关键位置，G3BP已引起广泛的关注。 结论 G3BP在高低转移癌系中的表达具有显著差异，G3BP的表达降低与高转移潜能具有相关性，提示G3BP可能参与肿瘤的转移过程，为G3BP功能的研究提供了新的线索。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑杰	北京大学医学部病理系	95	839	16.0	22.0
2	由江峰	北京大学医学部病理系	42	372	11.0	16.0
3	方伟岗	北京大学医学部病理系	40	289	9.0	15.0
4	吴秉铨	北京大学医学部病理系	48	393	10.0	17.0
5	刘宇欣	北京大学医学部病理系	2	58	2.0	2.0
6	王洁良	北京大学医学部病理系	14	173	7.0	13.0
7	崔湘琳	北京大学医学部病理系	12	168	7.0	12.0