核酸杂交的酶放大时间分辨荧光分析

• 作者: 刘洁 刘炳辰 宋娜玲 庄湘莲 李美佳 赵启仁 陈艾
• 来源期刊: 中国医学科学院学报
• 关键词: 核酸杂交分析 酶放大时间分辨荧光分析 酶放大镧系元素发光分析
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 84-88
• 页数: 5页
• 分类号: Q503
• 语种: 中文

摘要

目的为了建立一种新的非同位素的核酸杂交的测定方法-酶放大时间分辨荧光分析法(EATRFA)或酶放大镧系元素发光分析法(EALL),使核酸杂交分析能更广泛地应用于临床诊断.方法将生物素-链霉亲和素的高亲和力和放大作用、酶放大作用、镧系元素螯合物的固有优点和时间分辨测量技术结合起来.通过碱性磷酸酶把5-氟水杨酸磷酸酯转变为5-氟水杨酸(5-FSA),5-FSA与Tb3+和EDTA形成发荧光的三元复合物.结果对靶pBR322DNA测定的标准曲线范围宽,可达三个数量级;灵敏度为10pg;准确度为90%～115%.研究和优化了紫外灯照射时间,生物素化探针、AP-SA、5-FSAP和Tb-EDTA等的浓度以及洗涤方法等主要影响因素.发现了新的荧光稳定技术.结论核酸杂交的EATRFA或EALL是一种灵敏的无需转移的简单的全新分析方法,有很好的应用前景.