形成三螺旋DNA的寡核苷酸抑制内皮细胞组织因子基因的表达

• 作者: 任萍 刘勇 刘立杰 周永琴 应大君 戴光明 李黔宁 肖道虹 邓志宽 郑健
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 寡核苷酸,三螺旋型 基因,组织因子 基因表达 内皮,血管
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 190-194
• 页数: 5页
• 分类号: Q524
• 字数: 5098字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3949.2002.03.002

摘要

为探讨形成三螺旋DNA的寡核苷酸是否对切应力诱导内皮细胞组织因子基因表达有抑制作用,针对内皮细胞组织因子基因启动子内切应力反应元件,设计反向脱氧寡核苷酸序列T21GTa,采用固相亚磷酰胺三酯固相法合成脱氧寡核苷酸.在脱氧寡核苷酸的3'末端进行硫代磷酸酯修饰.应用电泳迁移分析观察寡核苷酸和硫代脱氧寡核苷酸的亲和性.在ECV304内皮细胞株观察γ-32P标记硫代磷酸酯三螺旋DNA寡核苷酸的细胞摄取及其对组织因子基因表达的影响.结果发现,硫代磷酸酯寡核苷酸T21GTa-ps与靶序列能形成三链DNA,其Kd值为3.6×10-10 mol/L.在内皮细胞株ECV304细胞,三螺旋DNA寡核苷酸-ps (T21GTa-ps)的细胞吸收率为11.65%,主要分布在核沉淀,约占吸收总量的77.25%,显著降低内皮细胞组织因子基因mRNA表达及组织因子蛋白合成的平均吸光度值,显著降低组织因子的促凝活性.此结果提示,硫代磷酸酯寡核苷酸T21GTa-ps对内皮细胞组织因子基因表达具有较好的抑制作用.