基因工程改造非β细胞分泌成熟胰岛素的研究

• 作者: 张新 沈坤堂 秦新裕 肖华胜 许相儒 韩泽广
• 来源期刊: 中华医学杂志(英文版)
• 学科: 医学
• 关键词: 人胰岛素原基因 1型糖尿病 基因治疗 胰岛
• 年，卷（期）: 2002,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 532-535
• 页数: 4页
• 分类号: R58
• 语种: 英文
• DOI: 10.3760/j.issn:0366-6999.2002.04.013

摘要

目的研究在非β细胞中表达成熟胰岛素,探索替代胰岛素注射或胰岛移植治疗1型糖尿病的方法 .方法采用重叠区扩增基因拼接法(gene splicing by overlap extention, gene SOEing)自胰岛素原基因组基因中扩增胰岛素原的cDNA,并于C肽的两端引入蛋白酶furin的识别和切割位点Arg-Xaa-Lys/Arg-Arg.将获得的突变体重组表达载体PcDNA3.1/C,通过脂质体法转染体外培养的Hela,293,和L02细胞,G418筛选L02细胞.同时用放射免疫和免疫荧光的方法监测细胞内外胰岛素的表达水平.结果成功地对胰岛素原cDNA的三个位点进行了突变,空载体转染的细胞无胰岛素表达.而在转染突变后胰岛素原基因cDNA的细胞培养液中胰岛素的表达量各不相同:Hela 和293细胞的暂态表达量分别为8.45～188.00?μIU/2.0×106 cells*d-1和159.88～242.14 ?μIU/2.0×106 cells*d-1, 筛选出的L02各细胞株的表达量为2.56～61. 95?μIU/2.0×106 cells*d-1;免疫荧光显示L02细胞浆内有囊泡状分泌颗粒 .结论突变的胰岛素原cDNA能成功转染非胰岛β细胞并表达胰岛素,为进一步开展糖尿病的基因治疗研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	秦新裕	复旦大学附属中山医院普外科	210	2042	26.0	39.0
2	韩泽广		48	236	7.0	13.0
3	张新		27	102	5.0	7.0
4	沈坤堂	复旦大学附属中山医院普外科	40	140	6.0	9.0
5	许相儒		3	17	3.0	3.0
6	肖华胜		4	12	2.0	3.0