猪白细胞介素-12的分子克隆与序列测定

• 作者: 仇华吉 兰文升 周艳君 王云峰 童光志 郭海龙
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 猪IL-12 基因克隆 PBMC
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 页码范围: 38-41
• 页数: 4页
• 分类号: R392.6
• 字数: 1485字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2002.01.013

摘要

为研究白细胞介素-12在机体免疫应答中的作用,从猪外周血提取单个核细胞(PBMCs),用含LPS的培养基培养细胞,从培养2 h和12h的活化细胞中分别提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出编码猪IL-12两个亚基的基因,其大小分别为720 bp(P35)和1 044 bp(P40),将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后,回收纯化,用SacI和SdI双酶切后,分别将其连接至pUC18质粒上,进行质粒PCR和SacI、SdI双酶切鉴定后筛选阳性克隆,并进行序列测定和分析.序列分析表明P35基因开放阅读框含有669个核苷酸,序列与人、小鼠和羊同源性分别为79.2%,37.6%,86.1%,P40基因开放阅读框含有975个核苷酸,与人和小鼠、羊基因序列的同源性分别为79.5%,53.1%,84.3%.结果表明克隆到了猪白细胞介素-12 P35和P40两个亚基的基因,得到的P35基因序列与国外报道完全一致,P40基因序列与发表的序列有4个碱基差异,提示P40基因可能存在多态性.