血管内皮生长因子受体<em>1</em>酪氨酸激酶的克隆、表达和功能

• 作者: 叶其壮 庄书斐
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 血管内皮生长因子受体 酪氨酸激酶 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 39-44
• 页数: 6页
• 分类号: Q5
• 语种: 英文

摘要

血管内皮生长因子受体1(Flt-1)在血管生成过程中起着重要的作用. Flt-1胞内域的酪氨酸激酶直接参与了VEGF与Flt-1结合后的胞内信号转导途径. 在原核系统中表达得到具有酶活性的Flt-1酪氨酸激酶融合蛋白, 并进行了初步的性质研究. 利用逆转录PCR 技术从人肝癌组织总RNA中得到Flt-1酪氨酸激酶区的cDNA, 将其克隆到表达载体质粒pGEX-KG 中 , 并在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中表达、纯化, 得到可溶的Flt-1酪氨酸激酶融合蛋白 (GST-F ). 虽然GST-F不包含目前已知的磷酸化位点, 但研究表明GST-F能够进行自磷酸化反应 , 并且其活性需要镁离子或锰离子的参与. 同时发现GST-F能够磷酸化合成底物polyE4Y, 而不能作用于MBP和Src相关肽. 底物磷酸化时最适的镁离子和锰离子浓度分别为15 mmol/L和0. 5 mmol/L. GST-F为寻找抗肿瘤药物提供了一个有效工具.