人胚鼻咽上皮细胞cDNA文库的构建及鼻咽癌相关基因的筛选

• 作者: 余鹰 向娟娟 张必成 曹利 李伟芳 李桂源 钱骏
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 医学
• 关键词: 鼻咽 胚胎 cDNA文库 基因克隆 NAG4
• 年，卷（期）: 2002,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 302-306
• 页数: 5页
• 分类号: R739.63
• 字数: 3901字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2002.02.028

摘要

为了进一步分离人鼻咽组织特异性表达基因和鼻咽癌特异相关基因,采用SMART(switching mechanism at 5′ end of RNA transcript)技术,构建了人胚鼻咽上皮cDNA文库.从原代培养的人胚鼻咽上皮分离总RNA并纯化mRNA,利用经修饰的oligo(dT)引物(含sfiⅠB酶切位点)合成cDNA第一链,同时根据真核生物mRNA5′端帽子结构特点,利用SMART核苷酸(含sfiⅠA酶切位点)作为cDNA第一链在mRNA 5′端延伸出去的模板,进而以此序列为引物利用LD-PCR(long-distance-PCR)合成双链cDNA,双链cDNA经sfiⅠ(ⅠA和ⅠB)酶切和过柱分级分离后,克隆入经sfiⅠ酶切的λTrip1EX2载体后经体外包装而成cDNA文库.结果表明,原始人胚鼻咽上皮cDNA文库获得1.0×106个重组子,重组率达96%.文库扩增后,滴度达7.8×109 pfu/ml,插入cDNA平均长度为1.2 kb,用PCR从该文库扩增出本实验室新克隆的鼻咽癌相关基因NAG4的全长cDNA.构建的人胚鼻咽上皮cDNA文库具有良好的质量,该cDNA文库为进一步筛选、克隆鼻咽癌抑癌基因及鼻咽组织特异性表达基因奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李桂源	中南大学湘雅医学院肿瘤研究所	148	1383	17.0	30.0
2	余鹰	中南大学湘雅医学院肿瘤研究所	11	88	5.0	9.0
3	张必成	中南大学湘雅医学院肿瘤研究所	15	308	8.0	15.0
4	李伟芳	中南大学湘雅医学院肿瘤研究所	11	119	7.0	10.0
5	钱骏	中南大学湘雅医学院肿瘤研究所	4	28	3.0	4.0
6	曹利	中南大学湘雅医学院肿瘤研究所	12	75	6.0	8.0
7	向娟娟	中南大学湘雅医学院肿瘤研究所	15	296	7.0	15.0