人内皮细胞一氧化氮合酶红色荧光蛋白报告基因载体的构建与表达

• 作者: 姜勇 王静珍 秦清和 赵克森 邓鹏 邢飞跃
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 内皮,血管 细胞 一氧化氮合酶 基因表达
• 年，卷（期）: 2002,（16）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1093-1096
• 页数: 4页
• 分类号: R54
• 字数: 4045字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2002.16.005

摘要

目的研究血管壁切应力诱导的人血管内皮细胞内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的调控机制,构建在哺乳动物细胞中表达的eNOS红色荧光蛋白报告基因载体. 方法从人脐静脉内皮细胞基因组DNA中克隆eNOS启动子,将其构建到红色荧光蛋白载体pDsRed1-1上,经PCR、酶切和DNA测序鉴定后将重组载体转染293细胞,在荧光显微镜下观察其在细胞内的表达和分布情况.结果 PCR、酶切和DNA测序结果均表明重组载体pDseNOSRed的构建正确,该载体能在293细胞中高效表达.由eNOS启动子驱动表达的红色荧光蛋白大部分均匀分布于整个细胞中, 转染后12 h 开始出现,36～48 h为表达高峰,120 h后红色荧光几乎全部消失.结论成功构建了eNOS红色荧光蛋白报告基因载体,该载体能在哺乳动物细胞中高效表达,为研究血管壁切应力诱导血管内皮细胞eNOS基因表达的调控机制提供了一个重要而又方便的工具.