目的用粘粒法构建含有胞嘧啶脱氨酶(CD)、单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)双自杀基因的腺病毒载体,检测双自杀基因对不同消化道恶性肿瘤细胞的体外抑制作用.方法利用重组腺病毒载体介导的CD、HSV-tk融合基因感染人结肠腺癌细胞系LoVo、胃癌细胞系SGC-7901、肝癌细胞系BEL-7402,通过MTT法测定细胞存活率,通过细胞集落形成实验分析GCV(丙氧鸟苷)、5-FC(5-氟胞嘧啶)双前药(double prodrugs)对肿瘤细胞的杀伤作用和旁观者效应的大小.结果 Western Blot检测分析融合基因的表达,显示重组腺病毒介导的双自杀基因可以在3种肿瘤细胞中高效表达.使用前药GCV和5-FC后,各组肿瘤细胞的集落形成和细胞存活率显著低于对照组.感染细胞在混合细胞中比例较低时,就能获得明显的旁观者效应.联合两种前药能获得最大的细胞抑制作用,并且CD/5-FC系统对于消化道肿瘤细胞的杀伤作用强于HSV-tk/GCV系统.结论 CD、TK融合基因联合双前药治疗对消化道肿瘤有显著的体外抑制作用.