一种新的编码霍乱毒素的丝状噬菌体CTAKΦ

• 作者: 刘延清 祁国明 邓训安 高守一
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 霍乱弧菌 霍乱毒素 CTX元件 丝状噬菌体
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: R37
• 字数: 3975字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2002.01.001

摘要

目的探讨介导霍乱弧菌毒素基因水平转移的一种独特的遗传结构. 方法从O139群霍乱弧菌菌株FJ97129上清中分离出丝状噬菌体颗粒CTAKΦ,并进行电镜观察.从丝状噬菌体颗粒CTAKΦ中纯化出DNA,并进行链型分析.对pCTAK进行酶谱分析.用ctxAB、zot引物对pCTAK进行PCR扩增检测,用RS1探针对pCTAK进行Southern blot检测;用pCTAK转化DH5α和IEM101得到DX29和4329,将pCTAK克隆于pUC18载体并转入DH5α得到UD29,用GM1-ELISA检测DX29、4329、UD29的CT表达.对pCTAK的ctxAB、zot基因片段进行测序,并用DNASTAR软件和BLAST算法,在国际互联网上对测序结果进行序列分析. 结果发现和分离了一种编码霍乱毒素的质粒pCTAK,它以稳定的高拷贝数存在于1株天然的O139霍乱弧菌FJ97129中;酶谱分析发现其明显不同于CTX元件酶谱,在CTX元件中相当保守的酶切位点:BglⅡ、EcoRⅤ、PstⅠ、EcoRⅠ,在pCTAK中没有切点. ctxAB、zot引物对pCTAK的PCR扩增检测呈阳性,RS1探针杂交呈阳性;pCTAK的ctxAB、zot基因序列与已报道的序列有很高的同源性.pCTAK能直接或经载体转化DH5α和IEM101并表达CT.从FJ97129培养上清中分离出丝状噬菌体颗粒CTAKΦ,电镜观察并计算其直径大小为7nm左右.其全基因组大小为8.5kb,为单链DNA. 结论发现了一种新的编码霍乱毒素的丝状噬菌体CTAKΦ.