血友病A基因治疗的初步实验研究

• 作者: 储海燕 尹俊 康文英 戚正武 段宝华 王学锋 王振义 王鸿利 璩斌 胡翊群
• 来源期刊: 中华血液学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 血友病A 基因疗法 凝血因子Ⅷ 基因表达
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 138-142
• 页数: 5页
• 分类号: R55
• 字数: 4334字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0253-2727.2002.03.006

摘要

目的制备血友病A的治疗基因,从in vivo 途径观察人凝血因子Ⅷ(hFⅧ)在动物体内的表达.方法将B区缺失(760～1*!639位氨基酸)的hFⅧ cDNA克隆至真核细胞表达载体pRC/RSV,与转染试剂DOTAP-Cholesterol liposome混合,制备治疗基因pRC/RSV-hFⅧBD-DOTAP-Cholesterol.肌肉注射给BALB/c小鼠后,在第2,10,20,30,40,50天取小鼠的血液以及心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌等组织.检测血浆中的hFⅧ抗原和抗体,用PCR和RT-PCR方法检测hFⅧBD cDNA在小鼠各组织基因组中的分布及其转录情况,免疫组织化学染色检测各组织中hFⅧ的表达.结果在注射结束后的第48小时,小鼠血浆和组织中即有hFⅧ的表达,第10天血浆中的hFⅧ抗原水平最高,达17.55 ng/ml,以后逐渐下降.血浆中的hFⅧ抗体在注射结束后的第10天出现,以后缓慢升高,第50天时达37.06 U/ml.PCR、RT-PCR检测和免疫组织化学染色显示小鼠各组织中均有hFⅧBD cDNA的存在、转录和表达,但随着时间推移逐渐减少.脾、肺、肾脏中hFⅧBD cDNA的转录和表达时间均长于心脏、肝脏和骨骼肌.结论由pRC/RSV-hFⅧBD与DOTAP-Cholesterol liposome结合而制备的治疗基因pRC/RSV-hFⅧBD-DOTAP-Cholesterol能够通过in vivo途径在动物体内很好地表达hFⅧ,这为临床基因治疗血友病A提供了实验依据.