HCV准种单链构象多态现象的检测

• 作者: 李军
• 来源期刊: 生物制品快讯
• 学科: 医学
• 关键词: 单链构象 DNA序列 致突变检测 多态现象 SSCP法
• 年，卷（期）: 2002,（10）
• 页码范围: 18
• 页数: 1页
• 分类号: R392－33

摘要

单链构象的多态现象(SSCP)是根据PCR技术广泛用于检测不同DNA序列的一门技术，由遗传学家开发的致突变检测，最近已采用于病毒基因组准种的分析，如丙型肝炎病毒(HCV)。由于该技术严格的标准化及其检测的局限性使之很难推广，HCV高变异区准种内的变异体被克隆到Puc　119，引起质粒定量，这种变种可用作SSCP最佳模板，所研究的变量有许多检测到的变异体，少数变异体检测的敏感性，电泳温度、单链DNA产生的方法、PCR循环次数的影响以及与校读能力有关的DNA多聚酶的应用。结果表明，它是能在准种内至少测出5种变异体的最佳方法，并能检出低至2％水平的准种内的变异体，电泳在室温18小时其重复性最好，使用Taq多聚酶单个引物作20次循环产生的单链DNA给准种构成一个精确的映象，Pfu多聚酶的应用减低了检测较小的带型的敏感性。SSCP法提供了评价HCV准种一个精确的工具。