肝细胞生长因子在人肝细胞中的表达及对肝细胞损伤的保护作用

• 作者: 何勇 周峻 窦科峰
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝细胞生长因子 载体蛋白质类 肝细胞 基因转移
• 年，卷（期）: 2002,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 275-278
• 页数: 4页
• 分类号: R65
• 字数: 3458字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2002.04.017

摘要

目的构建肝细胞生长因子(HGF)真核细胞表达载体,并观察其在人正常肝细胞中的表达以及对细胞增殖和抗损伤能力的影响.方法利用基因重组技术将HGF与绿色荧光蛋白(GFP)融合并构建真核表达质粒,通过脂质体介导法,导入正常人肝细胞系中.用荧光显微镜以及免疫组织化学方法观察HGF表达情况.采用[3H]-TdR掺入DNA法、PCNA免疫组织化学观察肝细胞DNA合成,了解肝细胞增殖能力的变化.用CCl4造成急性肝细胞损伤,通过测定细胞存活率、细胞内丙氨酸氨基转移酶(ALT)、K+的漏出量了解肝细胞的抗损伤能力.结果酶切鉴定证实HGF片断已克隆到pEGFP-N3的BamHⅠ和SalⅠ位点之间,在转染人正常肝细胞后,利用荧光显微镜观察可见到绿色荧光蛋白的表达,用免疫组化方法进一步证实了HGF蛋白在细胞中的表达.[3H]-T转导HGF的肝细胞的DNA合成明显增加(转染96h后,[3H]-TdR掺入量为对照组的7倍).PCNA免疫组化结果显示转导HGF的肝细胞阳性率明显增加,肝细胞增殖活性增加.转导HGF的肝细胞抗CCl4损伤的能力明显增强,肝细胞存活率显著提高(83%与61%,P<0.05),细胞内丙氨酸氨基转移酶(ALT)、K+的漏出显著降低(分别为35.16 U*L-1与 65.31 U*L-1,P<0.01,5.59 mmol/L 与6.02 mmol/L,P<0.01).另外从转导的肝细胞提取的培养液可对其他非转染细胞起促增殖作用,而这种作用可被HGF抗体封闭,提示HGF可被转导的肝细胞分泌到培养液中,并且分泌的HGF具有活性. 结论转染的HGF可在肝细胞中表达并有促细胞分裂活性,而且转染HGF后的肝细胞抗肝损伤能力增强.