海南根瘤菌nodABC基因DNA片段的克隆、测序和功能验证

• 作者: 李小红 杨苏声 温尚昆 王磊
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 海南根瘤菌 nodABC基因 克隆 测序 功能
• 年，卷（期）: 2003,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 628-632
• 页数: 5页
• 分类号: S646
• 字数: 2514字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2003.06.016

摘要

从海南根瘤菌(Rhizobium hainanense)I66提取总DNA,用EcoR I酶进行完全酶切和电泳,然后用苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)042B的nodABC DNA片段作探针进行Southern杂交,发现1条含有nodABC基因DNA片段的阳性条带,大小为2.1～2.5kb.通过电泳回收该DNA片段,用pUC18作载体连接,并转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH5 α,从而构建了含有nodABC的部分基因文库.提取该文库的质粒与nodABC探针做菌落杂交,筛选到nodABC的阳性克隆,称为pUER12.将含有nodABC的DNA片段与EcoR Ⅰ酶切的pBBR-MCS-5连接,转化大肠杆菌DH5 α,获得转化子pBER12.用三亲本杂交方法,把pBER12转入苜蓿中华根瘤菌AK1657,将其接合子进行结瘤实验,验证了pBER12具有nodABC基因的功能.然后将含有I66 nodABC片段的DNA与EcoRⅠ酶切的pGEM-7Z(+)连接、测序和进行同源性比较,发现I66 nodABC编码的蛋白与苜蓿中华根瘤菌具有高度的同源性.