P-选择素凝集素-EGF功能域的克隆、表达及其单克隆抗体制备

• 作者: 余奇文 倪培华 周同 宋巍 张冬青 王锋 陈楠
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: P-选择素 功能域 原核表达 单克隆抗体 功能
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 172-176
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 语种: 英文

摘要

制备特异性抗人P-选择素的凝集素-表皮生长因子(L-EGF)功能域的单克隆抗体. 利用特异引物, 通过RT-PCR从外周血血小板中扩增出人P-选择素的L-EGF功能域基因, 将其克隆至pET42b(+)载体中, 测序验证后转染大肠杆菌BL21, 经诱导表达了C端融合6×His的蛋白质. 融合蛋白质经分离纯化后, 免疫Balb/c小鼠, 应用杂交瘤技术, 通过间接ELISA筛选阳性克隆. 获得3株可稳定分泌抗L-EGF功能域单抗的杂交瘤细胞株(B10、F3和H5). 其亚型分别为IgG2、IgG1和IgG3; 轻链均为κ型. 所获的单抗对LPS刺激活化的人脐静脉内皮细胞均有特异性结合反应, 并可在体外阻断经凝血酶激活的血小板与中性粒细胞间的粘附. 表明所获的单抗可特异性识别结合天然P-选择素, 具有体外抗活化血小板与中性粒细胞粘附的功能, 为进一步应用此单抗进行P-选择素结构和功能及抗粘附治疗研究提供了实验基础.