河南华溪蟹2种C型凝集素原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 王兰 赵芳芳
• 来源期刊: 山西农业科学
• 关键词: 先天性免疫 无脊椎动物 重组融合蛋白 C型凝集素 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 696-700
• 页数: 5页
• 分类号: S917.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2481.2018.05.07

摘要

C型凝集素是一类模式识别受体蛋白,在先天性免疫中发挥重要作用.为了深入探明河南华溪蟹(Sinopotamon honanense)2种C型凝集ShLec 21和ShLec23在先天性免疫中的作用,研究将ShLec21和ShLec23基因部分编码区序列连接至pGEX-4T-1,构建了重组表达载体pGEX-4T-1-ShLec 21与pGEX-4T-1-ShLec23.随后将重组表达载体转至BL21 (DE3)感受态细胞,经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导,表达重组ShLec21-GST与ShLec23-GST融合蛋白并纯化.再以纯化蛋白作为抗原免疫日本大耳兔,第4次免疫后分离抗血清,并采用ELISA法检测抗体效价.结果显示,在28℃,0.2 mmol/LIPTG,诱导10b条件下,可获得ShLec21-GST和ShLec23-GST重组融合蛋白以包涵体形式高效表达;制备的兔抗河南华溪蟹ShLec21-GST与ShLec23-GST多克隆抗体效价均在1∶100 000以上.研究成功对河南华溪蟹ShLec21与ShLec23进行了原核表达,首次制备了高效价的抗河南华溪蟹ShLec21与ShLec23多克隆抗体,为后续研究ShLec21与ShLec23基因在河南华溪蟹先天性免疫中的作用提供了有力的工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王兰	山西大学生命科学学院	123	1118	16.0	28.0
2	赵芳芳	山西大学生命科学学院	2	1	1.0	1.0