狂犬病病毒受体P75NTR原核表达的抗原性分析及多克隆抗体制备

• 作者: 廖芳 彭可可 欧阳伶宣 罗廷荣 蒋元 覃雨阳 邓朝谦 邢杏伟 钟桃珍
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 狂犬病病毒 神经营养因子受体P75(P75NTR) 抗原性 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 1897-1902
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2015.10.1897

摘要

[目的]分析狂犬病病毒(Rabies virus,RV)神经营养因子受体P75(P75NTR)原核表达的抗原性及制备出多克隆抗体,为进一步研究RV与P75NTR的相互作用机制奠定基础.[方法]采用RT-PCR从感染Flury株的NA细胞中克隆P75NTR基因,选取P75NTR基因的418～681 nt和831～1080 nt两个区域(共513 nt,编码171个氨基酸),与pET-32a(+)重组构建原核表达载体,然后转化BL21 (DE3)感受态细胞进行表达,再以纯化的P75NTR重组蛋白免疫昆明小鼠制备抗P75NTR抗体,并以Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)检测其抗原性.[结果]以原核表达载体pET-P75-513转化BL21 (DE3)感受态细胞,经0.2 mmol/L IPTG诱导6h可获得较高表达量的P75NTR重组蛋白,且主要以可溶性蛋白形式进行表达,可用Ni-NTA树脂分离柱进行纯化.经Western blotting和IFA检测,发现制备获得的抗P75NTR抗体能与NA细胞表面自然的P75NTR及转染BHK-21细胞表达的P75NTR发生良好反应,且抗体效价高,可达1∶16000.[结论]原核表达的RV受体蛋白P75NT抗原性强,免疫小鼠获得的多克隆抗体特异性高,反应性良好.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗廷荣	广西大学动物科	40	314	11.0	15.0
2	覃雨阳	广西大学动物科学技术学院	5	18	3.0	4.0
3	彭可可	广西大学动物科学技术学院	3	4	1.0	2.0
4	廖芳	广西大学动物科学技术学院	4	4	1.0	2.0
5	钟桃珍	广西大学动物科学技术学院	2	0	0.0	0.0
6	邢杏伟	广西大学动物科学技术学院	2	0	0.0	0.0
7	邓朝谦	广西大学动物科学技术学院	1	0	0.0	0.0
8	蒋元	广西大学动物科学技术学院	1	0	0.0	0.0
9	欧阳伶宣	广西大学动物科学技术学院	1	0	0.0	0.0