鹅坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅲ的原核表达及抗原性分析

• 作者: 刘宇卓 李银 杨婧 赵冬敏 韩凯凯 黄欣梅
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 鹅坦布苏病毒 E蛋白 结构域Ⅲ 原核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 150-154
• 页数: 5页
• 分类号: S855.33
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2015.1.150

摘要

[目的]获得鹅坦布苏病毒(GTMUV)E蛋白结构域Ⅲ的原核表达重组蛋白并明确其免疫原性,为进一步研究其生物学功能及研制亚单位疫苗奠定基础.[方法]根据GenBank中GTMUVJS804株E蛋白结构域Ⅲ的同源基因序列设计1对引物,在其两端加入Flag标签序列和酶切位点,采用PCR扩增GTMUV的E蛋白结构域Ⅲ基因(EⅢ),然后与pET32a原核表达载体连接构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21 (DE3)后用IPTG诱导融合蛋白表达,并以Westernblotting鉴定其免疫原性.[结果]PCR扩增获得携带Flag标签序列的EⅢ基因片段约430 bp,将其插入pET32a载体可成功构建重组质粒pET32a-EⅢ.阳性重组菌经IPTG诱导表达5h即可得到融合蛋白,分子质量约33.0 kDa,主要以包涵体形式存在.Westem blotting鉴定结果显示,融合蛋白与抗Flag标签单克隆抗体、小鼠抗坦布苏病毒多克隆抗体均可发生特异性反应,检测到预期的目的条带.[结论]GTMUV E蛋白结构域Ⅲ能在大肠杆菌中成功诱导表达,且获得的融合蛋白具有良好的免疫原性,可用于研制GTMUV诊断抗原和亚单位疫苗.