猪MAVS基因原核表达载体的构建及其多克隆抗体的制备

• 作者: 应雪 张珂 李晓宁 李晓泉 梁晶晶 罗廷荣 赵倩楠
• 来源期刊: 中国兽医杂志
• 关键词: 猪MAVS 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 实验观察
• 页码范围: 39-42
• 页数: 4页
• 分类号: S858.28
• 语种: 中文

摘要

通过RT-PCR从PK-15细胞系中扩增克隆MAVS(mitochondrial antiviral signaling protein)基因,构建原核表达载体pET-MAVS220,转化感受态细胞Rosetta(DE3),利用IPTG诱导表达,重组MAVS经纯化后免疫4周龄昆明系小鼠制备抗线粒体抗病病毒信号蛋白(MAVS)多克隆抗体.诱导表达的最佳条件为IPTG 0.05 mmol/L,37℃诱导6h,重组MAVS以可溶性蛋白和包涵体两种形式表达.应用该重组蛋白免疫小鼠获得的抗MAVS多克隆抗体与纯化的重组MAVS蛋白反应效价可达1∶16000;该抗体与Poly (I∶C)刺激PK-15细胞产生的MAVS及与转染了重组MAVS基因真核表达载体pcDNA3.0-MA-VS的BHK-21细胞表达的MAVS蛋白发生特异性反应,效价可达1∶1 000,特异性良好.