猪STAT-1α基因的原核表达及其多克隆抗体制备

• 作者: 何晓霞 刘诚 尹珊 张珂 李延生 李晓宁 李晓泉 罗扬 谢琳娟
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 猪 STAT-1α基因 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 118-122
• 页数: 5页
• 分类号: S858.28
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.1.118

摘要

[目的]通过制备STAT-1α多克隆抗体,为进一步研究STAT-1α蛋白的功能特性及探索STAT-1α与猪瘟病毒间的相互作用机制奠定基础.[方法]利用RT-PCR从猪肾PK-15细胞中克隆出STAT-1α基因保守片段,与pET-32a(+)构建原核表达重组质粒,转化原核宿主菌(Rosetta),进行IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经纯化和复性浓缩后,免疫小鼠制备STAT-1α多克隆抗体.[结果]STAT-1α基因能与原核表达载体pET-32a(+)构建原核表达重组质粒pET-STAT-1o,转化大肠杆菌Rosetta后的最佳体外诱导条件是IPTG 0.5 mmol/L、诱导时间6h,其重组蛋白主要以包涵体的形式表达.STAT-1α多克隆抗体具有高效特异性,与真核细胞PK-15细胞作用后,在PK-15细胞内能检测到STAT-1α蛋白表达,可观察到大部分细胞胞浆内有绿色荧光,但胞核内几乎无荧光,即STAT-1α主要定位在正常PK-15细胞的细胞浆内表达.[结论]制备获得的猪STAT-1 α多克隆抗体特异性好,既能与原核细胞大肠杆菌(Rosetta)表达的STAT-1α反应,又能与真核细胞PK-15的STAT-1α发生反应.