广西巴马小型猪α干扰素基因克隆及其真核表达载体的构建

• 作者: 兰干球 吴丹 蒋钦杨 郭亚芬 陈宝剑 陈少梅
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 广西巴马小型猪 IFN-α基因 克隆 真核表达载体 构建
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 1558-1563
• 页数: 6页
• 分类号: S828.89
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2013.9.1558

摘要

[目的]克隆广西巴马小型猪α干扰素基因(poIFN-α)全部编码序列并构建其哺乳动物真核表达载体,为研发重组猪干扰素类免疫佐剂及生物治疗制剂提供参考依据.[方法]应用RT-PCR扩增广西巴马小型猪poIFN-α编码序列,链接至pMD 18-T载体构建重组质粒,以测序正确的重组质粒为模板,PCR扩增带有酶切位点的poIFN-α基因,然后连接真核表达载体pTARGET构建重组表达载体pTARGET-poIFN-α,并转化感受态细胞DH5α,经双酶切初步鉴定正确后送至北京诺赛生物有限公司测序,用DNASTAR软件及Primer Premer 5.0等对获得的基因序列进行分析.[结果]以广西巴马小型猪总RNA为模板扩增获得的目的片段为618 bp,包含poIFN-α基因全部编码序列;将克隆获得的poIFN-α基因插入哺乳动物真核表达载体pTARGET中,可成功构建广西巴马小型猪重组表达载体pTAR-GET-poIFN-α.广西巴马小型猪poIFN-α与GenBank上已发表的猪、鼠、人IFN-α基因同源性分别为97.0％、78.2％和66.3％;其成熟肽与普通猪相比,共有17个位点发生碱基突变,其中第63、189、198、288、544、545位点为无义突变,第88、119、163、182、186、195、263、301、306、553、560位点为错义突变.[结论]IFN-α成熟肽在哺乳动物中保守性较差;克隆获得的广西巴马小型猪poIFN-α基因能成功插入哺乳动物真核表达载体pTARGET中构建重组表达载体pTAR-GET-poIFN-α,为研发重组猪干扰素类生物治疗制剂、免疫佐剂、构建小型猪疾病动物模型等奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蒋钦杨	广西大学动物科学技术学院	97	256	8.0	12.0
2	兰干球	广西大学动物科学技术学院	92	263	7.0	12.0
3	郭亚芬	广西大学动物科学技术学院	113	570	9.0	20.0
4	陈宝剑	广西大学动物科学技术学院	12	59	5.0	6.0
5	吴丹	广西大学动物科学技术学院	12	20	3.0	4.0
9	陈少梅	广西大学动物科学技术学院	4	6	2.0	2.0