广西巴马小型猪CTGF基因真核表达载体构建 及其相关生物信息学分析

• 作者: 兰干球 吴延军 夏琴 奉玲丽 崔悦悦 朱思燃 江雨航 瞿秋红 莫家远 黄叶
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 广西巴马小型猪 CTGF基因 小鼠Hep3B细胞 脂质体转染 生物信息学
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 猪业科学
• 页码范围: 468-476
• 页数: 9页
• 分类号: S828.89
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2019.03.05

摘要

[目的]构建广西巴马小型猪结缔组织生长因子(CTGF)基因真核表达载体并鉴定其活性,为深入研究CT-GF在癌症发生中的作用及其分子机制提供参考,也为构建CTGF转基因广西巴马小型猪及研发基于CTGF的癌症基因治疗策略提供理论依据.[方法]利用RT-PCR从广西巴马小型猪肝脏组织中克隆CTGF基因,并将CTGF基因亚克隆到pDsRed-N1载体上,然后通过脂质体转染小鼠Hep3B细胞,转染48 h后于荧光显微镜下观察细胞是否表达红色荧光蛋白,同时利用在线生物信息学软件对其理化性质进行分析.[结果]成功克隆获得广西巴马小型猪CTGF基因编码区(CDS)序列,序列全长1050 bp,共编码349个氨基酸,与NCBI上已公布普通猪参考序列的同源性为99.5％,有5处碱基突变,且均为同义突变.将广西巴马小型猪CTGF基因亚克隆到pDsRed-N1载体上成功构建了阅读框架正确的广西巴马小型猪CTGF基因真核表达载体,转染小鼠Hep3B细胞48 h后有红色荧光蛋白表达.广西巴马小型猪CTGF蛋白具有较强的亲水性,其二级结构中α-螺旋、β-折叠、延伸链和无规则卷曲各占13.18％、5.73％、17.48％和63.61％.[结论]广西巴马小型猪CTGF基因在进化过程中的保守性非常稳定,通过构建的真核表达载体能转染小鼠Hep3B细胞并成功表达,可用于生产转基因广西巴马小型猪及研发与CTGF基因有关的疾病模型.