尼罗罗非鱼Lck多克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 冯鹏霏 张永德 杜雪松 林勇 潘传燕 罗洪林 陈忠 黄姻
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 尼罗罗非鱼 淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(Lck) 原核表达 包涵体 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 2304-2310
• 页数: 7页
• 分类号: S965.125
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2018.11.27

摘要

[目的]制备及鉴定尼罗罗非鱼淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(Lck)多克隆抗体,为深入研究罗非鱼Lck蛋白功能及其免疫机制打下基础.[方法]采用无缝克隆技术构建重组质粒pET-B2m-Lck,然后转入大肠杆菌B21(DH3)中进行诱导表达;经Ni-NTA树脂层析柱纯化后,以纯化的融合蛋白免疫日本大耳白兔制备Lck多克隆抗体,并采用Western blotting和ELISA检测多克隆抗体的特异性和免疫效价.[结果]尼罗罗非鱼Lck蛋白的亲水性均值(GRAVY)为-0.454,属于亲水性蛋白,具有较丰富且分布均匀的潜在抗原表位位点,无典型的跨膜区.经原核载体诱导表达获得的融合蛋白分子量约67.0 kD,主要以包涵体形式存在.免疫日本大耳白兔后可获得效价为1:256000的Lck多克隆抗体,且该多克隆抗体能特异性识别Lck蛋白.经Protein G亲和层析柱纯化的抗体浓度在10 mg/mL以上,纯度约95％,抗体纯化效果良好.[结论]经原核载体诱导表达获得的尼罗罗非鱼Lck融合蛋白具有良好的免疫原性,其免疫日本大耳白兔后获得的多克隆抗体具有高效价和特异性,可用于细菌感染罗非鱼后机体免疫机制的研究.