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斑马鱼zgc113227多克隆抗体及卵形鲳鲹EVM0008813多肽抗体的制备
斑马鱼zgc113227多克隆抗体及卵形鲳鲹EVM0008813多肽抗体的制备
作者:
张永德
宋漫玲
罗辉
余燕玲
林勇
陈晓汉
冯鹏霏
罗洪林
原文服务方:
南方农业学报
斑马鱼
zgc113227基因
卵形鲳鲹
EVM0008813基因
多克隆抗体
摘要:
【目的】制备斑马鱼zgc113227多克隆抗体和卵形鲳鲹EVM0008813多肽抗体,为后续深入研究斑马鱼zgc113227基因和卵形鲳鲹EVM0008813基因的功能特性提供重要工具。【方法】以卵形鲳鲹EVM0008813基因为查询序列,通过BLASTp搜索获得斑马鱼同源基因zgc113227(NP_001014341),以同源重组方式构建原核表达载体并转化大肠杆菌B21感受态细胞进行诱导表达,再以诱导表达获得的融合蛋白为抗原免疫日本大耳兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA检测抗体效价,然后通过Western blotting鉴定及SDS-PAGE检测zgc113227多克隆抗体特异性,并以高效液相色谱—质谱联用(HPLC-MS)纯化鉴定EVM0008813多肽抗体。【结果】斑马鱼zgc113227和卵形鲳鲹EVM0008813均属于亲水性蛋白,二者的氨基酸序列相似性达58.12%,同时表现为潜在抗原位点多、柔性较强、表面可及性高,且无跨膜结构和信号肽存在。斑马鱼zgc113227和卵形鲳鲹EVM000881的保守结构域均包含5个保守基序(Motif 1~Motif 5),且发现1个相同的保守结构域(DDE_Tnp_4),故推测二者均属于DDE_Tnp_4家族。以zgc113227蛋白与等容积弗氏完全佐剂混合为抗原制备获得的zgc113227多克隆抗体效价为1∶256000,特异性良好,可通过Protein G亲和层析柱进行纯化;以EVM0008813多肽与牛血清白蛋白(BSA)偶联为抗原制备获得的EVM0008813多肽抗体效价为1∶256000,经HPLC-MS纯化鉴定抗体纯度达95.35%,特性良好。【结论】制备获得的斑马鱼zgc113227多克隆抗体和卵形鲳鲹EVM0008813多肽抗体纯度高、抗体效价高、特异性良好,可为斑马鱼zgc113227基因和卵形鲳鲹EVM0008813基因功能研究提供有利工具。
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内容分析
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文献信息
篇名
斑马鱼zgc113227多克隆抗体及卵形鲳鲹EVM0008813多肽抗体的制备
来源期刊
南方农业学报
学科
关键词
斑马鱼
zgc113227基因
卵形鲳鲹
EVM0008813基因
多克隆抗体
年,卷(期)
2023,(7)
所属期刊栏目
畜牧·兽医·水产·蚕桑
研究方向
页码范围
2033-2041
页数
8页
分类号
S917
字数
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.2095-1191.2022.07.027
五维指标
传播情况
被引次数趋势
(/次)
(/年)
版权信息
全文
全文.pdf
引文网络
引文网络
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共引文献
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节点文献
斑马鱼
zgc113227基因
卵形鲳鲹
EVM0008813基因
多克隆抗体
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
南方农业学报
主办单位:
广西壮族自治区农业科学院
出版周期:
月刊
ISSN:
2095-1191
CN:
45-1381/S
开本:
大16开
出版地:
邮发代号:
创刊时间:
1964-01-01
语种:
chi
出版文献量(篇)
7029
总下载数(次)
0
总被引数(次)
43586
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