人输卵管蛋白全长cDNA克隆及真核细胞中的表达

• 作者: 左嘉客 潘勇 罗金平 顾正 颜桂军
• 来源期刊: 生殖与避孕
• 学科: 生物学
• 关键词: 人输卵管黏膜上皮细胞cDNA文库 人输卵管蛋白 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2003,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 259-265
• 页数: 8页
• 分类号: Q492.5
• 字数: 5071字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-357X.2003.05.001

摘要

目的:克隆人输卵管蛋白(hOviductin)全长cDNA序列,真核细胞中表达,并了解hOviductin是否与大鼠卵母细胞结合.方法:构建人输卵管黏膜上皮细胞cDNA文库,以32P标记的兔输卵管蛋白全长cDNA序列为探针,自文库中筛选hOviductin全长cDNA序列.将获得的hOviductin编码区cDNA序列插入pEGFP-N1真核表达载体,转染HeLa细胞,表达分泌重组的绿色荧光蛋白(EGFP)-hOviductin,并估量其浓度.激光扫描共聚焦显微镜下观察EGFP-hOviductin与大鼠卵巢的卵丘细胞-卵母细胞复合物(COC)或去除透明带后的裸卵的结合情况.结果:所构建的cDNA文库重组率为98.5%,滴度为1.1×106pfu/mL.克隆所得hOviductin全长cDNA约为2 500 bp,Gen-Bank的登录号为AY189737.EGFP-hOviductin在条件培液中的浓度为0.236 nmol/L,能结合在去透明带的大鼠裸卵质膜外表面,而未见其与COC结合.结论:hOviductin能在HeLa细胞中表达分泌,其分泌产物可结合于大鼠裸卵质膜外表面.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘勇	复旦大学上海医学院	2	4	1.0	2.0
3	顾正	计划生育药具国家重点实验室上海市计划生育科学研究所	4	9	2.0	3.0
4	罗金平	复旦大学上海医学院	2	4	1.0	2.0
10	颜桂军	复旦大学上海医学院	4	13	3.0	3.0