增强型RACE技术克隆辐射诱导小鼠肠上皮新基因RS1

• 作者: 任洓 刘晓宏 楼淑芬 王军平 王锋超 章波 粟永萍 高京生
• 来源期刊: 中华放射医学与防护杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 增强RACE 逆转录PCR 探针杂交 RS1基因
• 年，卷（期）: 2003,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 324-326
• 页数: 3页
• 分类号: R81
• 字数: 2428字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5098.2003.05.005

摘要

目的在获得了辐射诱导小鼠肠上皮新基因RS1 EST序列的基础上获得全长cDNA.方法RT-PCR方法对RS1基因进行表达谱分析,找到表达丰度较高的组织提取总RNA作为模板,应用增强RACE技术即结合生物素探针富集靶cDNA的方法克隆RS1的cDNA末端.结果克隆到RS1片段3′端约2kb的序列.该序列5′端包含已知的RS1片段,3′端具有明显的polyA加尾信号,有编码区的终止密码子.明确了RS1的正、负链及其蛋白编码方向,为RS1 5′端的克隆提供了必要信息.结论结果与本实验的设计完全一致,说明这一方法对从表达丰度低,难以设计最佳基因特异性引物的EST序列克隆其对应的全长cDNA是可行的,同时为下一步研究RS1在小鼠肠上皮辐射应激反应中的作用和被辐射诱导表达的调控模式奠定了基础.