红系细胞中Cre重组酶介导的位点特异性片段交换

• 作者: 严皓珩 刘德培 李兴国 梁植权 郝德龙
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 染色体整合 位点特异性重组 Cre/Lox 珠蛋白基因 基因沉默
• 年，卷（期）: 2003,（10）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 947-951
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 语种: 英文

摘要

Cre介导的片段交换技术利用重组酶Cre的位点特异性重组特性, 在基因组的特定位点进行靶片段与目的片段的交换. 运用互为反向的Lox位点, 在鼠红白血病MEL细胞中进行靶载体的整合和交换载体的交换, 探讨在特定的染色质环境下红系特异性顺式作用元件的功能. 电穿孔转染MEL细胞后从含有潮霉素(hygromycin)的选择性半固体培养基中挑取MEL细胞单克隆, 通过PCR和Southern杂交鉴定整合完整性和拷贝数, 获得三种整合有靶载体p1L-HyTk-L1-β-EGFP-neo的细胞株A, B和D. 交换载体pL1-HS2-1L(含有732-bp的人β-珠蛋白基因簇5′ DNase I 高敏位点2核心片段)和Cre表达载体pBS185共转染细胞株A, 9-(1,3-二羟-2丙氧甲基)鸟嘌呤(gancyclovir)负筛选后挑取单细胞克隆A-HS. PCR检测显示HS2片段以反方向进行了交换. 流式细胞仪分析显示平均的荧光细胞百分比(2.42 %)低于未交换的细胞株A (35.94 %). A-HS中EGFP的低表达可能是处于非容许方向的HS2片段出现方向依赖性基因沉默所致.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘德培	中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室	32	162	7.0	11.0
2	梁植权	中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室	9	51	4.0	7.0
3	郝德龙	中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室	3	0	0.0	0.0
4	李兴国	中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室	2	0	0.0	0.0
5	严皓珩	中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室	1	0	0.0	0.0