表达Cre重组酶Cre-pCEP4载体的构建及其在Cre/loxP重组系统中的应用

• 作者: 周杨 唐小春 宋娜 张明军 朱建国 李莉 欧阳红生 逄大欣 闫森
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: Cre-pCEP4 Cre/loxP重组系统 猪胚胎成纤维细胞 MCF-7细胞系
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 196-201,封2
• 分类号: Q291
• 语种: 中文

摘要

目的:构建表达Cre重组酶的载体Cre-pCEP4,并验证其能够有效识别loxP位点,为人类疾病动物模型的建立提供依据.方法:构建重组载体Cre-pCEP4和pStop-eGFP,利用Fugene HD转染猪胚胎成纤维细胞(PEF)和MCF-7细胞系,利用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况.结果:成功构建重组载体Cre-pCEP4和pStop-eGFP,将2个载体瞬时共转染PEF;经潮酶素B筛选出Cre重组酶稳定表达的MCF-7细胞系瞬时转染pStop-eGFP,在荧光显微镜下观察2种细胞均有绿色荧光蛋白的表达.而单独转染pStop-eGFP的MCF-7细胞系和PEF均未见绿色荧光蛋白的表达.结论:重组载体Cre-pCEP4在细胞内能够表达Cre重组酶,并且表达的Cre重组酶能够识别loxP位点,删除两同向loxP间的DNA片段.