表达Cre重组酶的真核细胞系的建立及在重组伪狂犬病病毒研究中的应用

• 作者: 于春梅 周斌 徐亚林 曹瑞兵 苏鑫铭 陈溥言
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 伪狂犬病病毒 PCR Cre重组酶 真核细胞系 loxP
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 页码范围: 114-119
• 页数: 6页
• 分类号: S852.4
• 字数: 4708字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-2030.2007.04.024

摘要

根据Cre基因序列设计并合成1对引物,PCR扩增出Cre基因编码区,克隆于pIREShyg载体,得到重组质粒pIREShyg-Cre,转染HEK-293A细胞后经400 μg·mL-1 Hygromycin B的筛选,将其中1个阳性克隆命名为293A-Cre.利用伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)S03109株(带有gfp报告基因表达盒及loxP位点)感染293A-Cre细胞,荧光显微镜观察、PCR及Western blot检测gfp基因的表达.结果表明,S03109感染293A-Cre二代后loxP位点间的gfp表达盒被删除,获得重组病毒S0419.将S0419感染已转染pBlulox的293A-Cre细胞,在RK13细胞上筛选得到表达LacZ的重组病毒S06293.S06293在293A-Cre细胞上传代2次,X-Gal原位染色表明LacZ的表达消失.测序结果证实,在Cre重组酶作用下,2个同向loxP序列之间的外源基因序列被正确除去.以上结果表明,本研究构建的稳定表达Cre重组酶的293A-Cre细胞系可以用于在包含有loxP位点的PRV基因组中外源基因的快速删除或整合.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈溥言	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	269	2875	28.0	40.0
2	周斌	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	62	792	17.0	26.0
3	曹瑞兵	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	71	897	19.0	28.0
4	苏鑫铭	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	8	81	4.0	8.0
5	于春梅	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	3	13	3.0	3.0
6	徐亚林	南京医科大学微生物与免疫学教研室	3	13	3.0	3.0