重组猪IL-7在真核细胞的分泌表达及生物活性分析

• 作者: 仲飞 张考 李文艳 李秀锦 林洪羽 温洁霞 王利月 陈慧慧
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 重组猪白细胞介素-7 真核表达 生物活性
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 页码范围: 98-101,106
• 页数: 5页
• 分类号: S814.8
• 语种: 中文

摘要

为了解猪IL-7(pIL-7)在防治猪免疫抑制性传染病及疫苗生物佐剂中的作用,通过RT-PCR方法从猪脾脏中扩增出含有自身信号肽序列的pIL-7 cDNA基因,将其克隆到pcDNA3.1A表达载体上,构建出羧基端与Myc/His融合的pIL-7基因真核表达载体pcDNA3.1A-pIL-7/MH.由磷酸钙介导将pcDNA3.1A-pIL-7/MH质粒转染人类胚胎肾细胞293T(HEK293T)使其进行瞬时表达,以Western-blot检测构建的pIL-7基因表达载体是否可介导重组pIL-7在真核细胞中进行分泌型表达.然后利用Ni-NTA琼脂糖亲和层析纯化表达的重组pIL-7,并通过淋巴细胞增殖试验检测其的生物活性.结果表明,扩增的pIL-7基因序列与GenBank序列完全一致；构建的表达载体可介导重组pIL-7在真核细胞HEK293T中进行分泌型表达.表达的重组pIL-7对猪脾淋巴细胞有明显的促增殖效应.由此可见,利用真核细胞表达的重组pIL-7具有生物活性.