重组单增李斯特菌溶血素O在HEK293T细胞中的分泌表达及活性分析

• 作者: 仲飞 常玉梅 张建楼 张永红 李文艳 温洁霞 王利月
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 单增李斯特菌 溶血素O 真核表达 溶血活性
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 页码范围: 53-57
• 页数: 5页
• 分类号: S855.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2015.0111

摘要

为研究单增李斯特菌分泌的溶血素O（LLO）的免疫佐剂作用，需要构建其真核表达载体，使其在动物体内进行分泌表达，从而发挥其生物佐剂活性。为此，本试验通过PCR方法从LM 基因组DNA中扩增了LLO基因，并将其插入到带有CD5信号肽的质粒pcDNA3．1ACD5sp的信号肽下游构建成真核表达载体，然后转染人胚肾细胞 HEK293T 细胞使其分泌表达，用 Ni‐NTA琼脂糖凝胶层析法从培养基中分离纯化重组 LLO蛋白，通过Western‐blot对其进行鉴定，并用溶血试验鉴定其生物活性。结果表明，扩增的LLO基因序列与Gen‐Bank中的基因序列完全一致，在HEK293T细胞中表达的重组LLO在CD5信号肽介导下能被分泌到细胞外，并具有较强的溶血活性，这为进一步研究LLO的功能提供了必要的条件。