单增李斯特氏菌溶血素基因的克隆及原核表达

• 作者: 区燕宜 叶贺佳 吴晓薇 廖明 徐小芹 徐成刚 江经纬 马保华
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 单核细胞增生性李斯特氏菌 溶血素基因 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 46-50
• 分类号: S852.61
• 字数: 2993字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2011.08.017

摘要

参考GenBank收录的单增李斯特菌Hly基因序列，设计1对引物，采用PCR技术扩增出单增李斯特氏菌的溶血素基因Hly（不含有信号肽部分），得到一条1590bp的条带。将其连入pMD18-T载体，经酶切、PCR鉴定和序列测定法进行鉴定。测序正确后，将该基因插入到pET-28a中构建原核表达载体pET-28a—sH1y，将重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导，将诱导产物用SDS-PAGE和Western-blot鉴定。结果显示，Hly基因可以在大肠杆菌中获得表达，表达产物分子质量约为65kU，与预期蛋白质分子质量大小一致。经Western、blotting鉴定可知，诱导表达产物以可溶形式存在，可被兔抗LM阳性血清特异识别，具有较好的抗原活性，为进一步研制基于溶解素蛋白的诊断抗原和特异性单克隆抗体，开展LM的致病与免疫机理研究奠定基础。