单核细胞增生性李斯特菌溶血素基因的原核表达

• 作者: 任艳红 李一经 王新生
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 单核细胞增生性李斯特氏菌 溶血素基因 载体pGEX 原核表达
• 年，卷（期）: 2005,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1078-1080,1085
• 页数: 4页
• 分类号: R378.99
• 字数: 2881字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2005.12.012

摘要

目的为获得大量的单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lmo)溶血素(Hemolysin,hly)蛋白,以便研制Lmo诊断试剂及其在疫苗研制方面的作用.方法本文应用Primer Premier 5.00设计引物,引入Bam HⅠ和XhoⅠ酶切位点,以前期合成构建的pMD18-T-hly质粒为模板,通过PCR方法扩增出Lmo 0586株溶血素基因.相应酶切后,克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,构建pGEX-6p-hly重组质粒,转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行表达.带有重组质粒pGEX-6p-hly的大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE及免疫印记分析.结果 PCR体外扩增hly基因产物大小约为1 624bp,成功构建了重组表达质粒pGEX-6p-hly;SDS-PAGE显示蛋白表达带的分子量约为72ku,重组蛋白主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的20.8%;Western免疫印记表明具有良好的反应原性.结论在国内首次构建重组质粒pGEX-6p-hly,并以融合蛋白的形式进行了高效表达,同时该蛋白具有特异的抗原反应性,为研制Lmo诊断试剂及其在疫苗研制中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李一经	东北农业大学动物医学院预防兽医学教研室	219	1679	20.0	27.0
2	任艳红	东北农业大学动物医学院预防兽医学教研室	6	71	5.0	6.0
3	王新生		3	17	2.0	3.0