单增李斯特氏菌actA基因的克隆及原核表达

• 作者: 卜昭阳 崔丽瑾 张爱玲 张辉 李晓艳 王俊霞 王兴龙 闫广谋
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 单增李斯特氏菌 actA基因 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 14-17
• 页数: 4页
• 分类号: S852.61
• 字数: 3076字
• 语种: 中文

摘要

利用PCR技术从单增李斯特氏菌中扩增出actA基因,将PCR产物纯化后克隆到pMD 18T simple vector中.成功构建出克隆载体pMD-18T/actA.以BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ分别双酶切pMD-18T/ActA和表达载体pGEX-3X,将纯化的actA基因亚克隆到表达载体pGEX-3X.构建的重组表达载体pGEX-3X/ActA转化到E.coli BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE分析,可见约120 ku外源蛋白带,Western blot分析表明该蛋白可与单增李斯特氏菌多克隆抗体发生特异性反应.该研究为ActA的生物学特性和功能的研究及诊断试剂的研制奠定了基础.