产单核细胞李斯特菌plcB基因的克隆与原核表达

• 作者: 殷月兰 焦新安 田德斌 董慧 袁舟 黄金林
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 产单核细胞李斯特菌 plcB基因 广谱磷脂酶C 原核表达
• 年，卷（期）: 2007,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 652-655
• 页数: 4页
• 分类号: R378.99
• 字数: 3610字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2007.07.005

摘要

目的 克隆并原核表达产单核细胞李斯特菌plcB基因.方法 利用PCR技术从产单核细胞李斯特菌基因组中扩增不含编码信号肽的plcB基因.采用T-A克隆构建pGEM-T-plcB重组质粒,BamH Ⅰ、Xho Ⅰ双酶切pGEM-T-plcB获得plcB片段后再插入pGEX-6p-1原核表达载体,获得pGEX-6p-1-plcB重组表达质粒并在表达宿主菌BL21中诱导表达.对表达产物进行纯化和SDS-PAGE、Western-blotting、磷脂酶活性实验分析.结果 克隆的plcB基因长834bp,与GenBank上公布的序列完全相同;表达的与GST标签蛋白融合的广谱磷脂酶C蛋白(GST-PC-PLC)具有磷脂酶生物活性和免疫原性.结论 成功构建产单核细胞李斯特菌plcB基因的原核表达质粒,并在大肠杆菌中得到有效表达,这为进一步研究PC-PLC蛋白的致病与免疫机理奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	焦新安	扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室	249	2602	25.0	38.0
2	黄金林	扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室	115	959	16.0	26.0
3	殷月兰	扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室	36	296	10.0	16.0
4	董慧	扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室	6	46	4.0	6.0
5	袁舟	扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室	3	23	3.0	3.0
6	田德斌	扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室	3	16	3.0	3.0