应用Cre/loxp系统构建含有BAC序列的重组伪狂犬病毒

• 作者: 于之清 于海 单同领 叶超 李国新 梁超 王涛 童光志 童武 郑浩 高飞
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 伪狂犬病毒变异株 细菌人工染色体 Cre/loxp系统
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 病毒
• 页码范围: 22-28
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.1
• 字数: 3488字
• 语种: 中文

摘要

近年来我国出现伪狂犬病毒变异株,导致猪伪狂犬病重新爆发流行.为研究伪狂犬病毒变异株毒力增强与抗原变异的分子机制,需要建立该病毒的感染性克隆操作系统.本研究通过构建转移载体pTEGGF,利用同源重组将含有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)表达框及两翼各一个loxp位点,插入到伪狂犬病毒变异株PRV JS-2012 gG编码区下游,获得重组病毒rJS2012-gG/EGFP.将表达Cre重组酶的质粒pcDNA3.1-Cre转染BHK-21细胞,再感染rJS2012-gG/EGFP,筛选获得含有单一loxp位点的重组病毒rJS2012-gG/loxp.将rJS2012-gG/loxp基因组、含有EGFP标记基因的BAC载体pBeloBAC11-EGFP和pcDNA3.1-cre共转染BHK-21,获得含有BAC序列插入的重组病毒rJS2012-BAC.一步生长曲线与空斑试验显示,重组病毒rJS2012-BAC在体外生长略慢于亲本病毒.本研究成功构建了含有BAC载体的重组伪狂犬病毒,为进一步建立伪狂犬病毒变异株的感染性克隆操作系统,开展变异株的分子病原学研究打下良好基础.