狂犬病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 于曼 刘忠钰 姜涛 朱武洋 秦成峰 秦鄂德 袁慧君 陈水平
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 狂犬病毒 病毒载体 SAE株 绿色荧光蛋白 西尼罗病毒prME蛋白
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1047-1051
• 页数: 5页
• 分类号: R393.3
• 字数: 3869字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2008.11.015

摘要

目的 构建狂犬病毒载体,为新型疫苗研究提供依据.方法 将狂犬病毒减毒株SAE基因组分段扩增,然后经逐步拼接得到全基因组克隆,并在其中引入转录终止起始元件和多克隆位点获得重组质粒pSAETOPO.将绿色荧光蛋白(EGFP)基因和西尼罗病毒prME基因分别克隆至pSAETOPO,然后将带有这两个基因的狂犬病毒全长cDNA切下并克隆至pcDNA3.1(+)载体.将获得的重组质粒pcSAE-GFP和pcSAE-ME转染细胞,分别观察辅助病毒对外源基因表达的影响.结果 获得狂犬病毒载体质粒pcSAE-GFP和pcSAE-ME,经酶切分析和序列测定表明所构建克隆是正确的.pcSAE-GFP及pcSAE-ME转染细胞后,在辅助病毒存在下可表达相应外源基因.结论 构建的狂犬病毒载体质粒可表达外源基因,为进一步获得表达外源基因的重组狂犬病毒奠定了基础.