诱导性表达Cre重组酶转基因载体的构建及鉴定

• 作者: 倪红霞 张雷 王尔孚 陈立梅
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: Cre重组酶 诱导性启动子 遗传载体
• 年，卷（期）: 2008,（46）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 9076-9079
• 页数: 4页
• 分类号: R965.1
• 字数: 4112字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.46.021

摘要

背景:猪在遗传上与人类相似,因此猪是研究人类疾病最好的动物模型,而对于这方面的研究在国内外报道较少.目的:建立诱导性表达Cre重组酶的转基因载体.设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-10/2008-05在吉林大学农学部畜牧兽医学院完成.材料:DH5a菌株E.coliDH5 α,质粒pcDNA3.1(+)、PET28a(+)、pCIneo.重组质粒PMD-Cre和猪成纤维细胞由北华大学医学部基础医学院细胞生物教研室保存;重组质粒pGC-FRT2NeoRRRR和Mx1克隆载体pGL3-Mx1由意大利Stefano教授馈赠.方法:构建的载体包括以下元件:Mx1启动子用来启动Cre的表达,Cre的作用是工具便于以后做基因敲除,BGHpolyA是一个终止信号,FRT2NeoR中的FRT是FLP酶的识别位点便于切除筛选标记,NeoR是筛选标记.通过聚合酶链反应方法分别从pGL3Mx1载体上和pcDNA3.1(+)载体上扩增猪Mx1启动子和BGHpolyA.利用重叠聚合酶链反应方法获得猪源的Cre重组酶基冈.并从pGCFRT2NeoR上用Xhol I and Sal I酶切得到FRT2NeoR盒子.将上述4个片段利用SOE-PCR及酶连接的方法用T4 DNA连接酶连接,然后利用原核表达载体PET28a(+)构建出Cre表达载体Mx1-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR.主要观察指标:Cre重组酶表载体PET28a(+)-Mx1-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR的鉴定.结果:PET28a(+)-Mx1-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR重组质粒经Nhe I和Not I双酶切后完全符合理论上可切出的大小片段,载体构建成功.结论:成功的构建了诱导性表达Cre重组酶表达载体Mx1-Cre-BGHpolyA-FRT2neoR.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张雷	北华大学医学部基础医学院形态实验室	14	33	4.0	5.0
2	陈立梅	北华大学医学部基础医学院细胞生物教研室	12	50	5.0	6.0
3	王尔孚	北华大学医学部基础医学院细胞生物教研室	7	21	2.0	4.0
4	倪红霞	北华大学医学部基础医学院形态实验室	14	99	5.0	9.0