人骨保护素成熟肽表达载体的构建、表达及重组蛋白免疫学鉴定

• 作者: 张镜宇 戴芳 王宝利 邱明才 郭刚
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 破骨细胞 抑制因子,免疫 毕赤酵母 基因表达
• 年，卷（期）: 2003,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 691-693
• 页数: 4页
• 分类号: Q8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2003.11.001

摘要

目的:构建人骨保护素(OPG)成熟肽cDNA重组表达载体,实现其在毕赤酵母中的高效表达.方法:由人成骨细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增得到人OPG成熟肽cDNA,克隆入分泌型表达载体pPIC9K,转化酵母细胞,G418筛选多拷贝整合的重组子进行甲醇诱导表达,产物行Western blotting鉴定.结果:成功构建了人OPG成熟肽表达载体,该载体能在酵母细胞中获得分泌表达,诱导96 h的表达量占上清总蛋白的30%.重组蛋白相对分子质量约55 ku,可被OPG抗体识别.结论:重组人OPG成熟肽在酵母表达系统获得较高水平表达,为进一步研究开发基因工程药物准备了条件.