G250抗原肽与HBcAg融合基因原核表达载体的构建及表达蛋白的免疫分析

• 作者: 刘庆勇 刘波 孙泽强 杨广笑 王全颖 王司军 陈杰
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 融合蛋白 G250 HBcAg 免疫原性 肾癌
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 6-11
• 页数: 6页
• 分类号: R737.11
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201401002

摘要

目的 构建肾癌G250抗原肽与HBcAg重组基因的原核表达质粒pET28a(+)/C-G250肽-C,并通过大肠杆菌进行原核表达并纯化,分析表达融合蛋白的免疫原性及抗原性.方法 PCR扩增编码G250抗原中249～268氨基酸的基因片段,将G250肽插入去除主要免疫优势区的重组质粒pGEMEX/HBcAg中,获得重组质粒pGEMEX/C-G250肽-C,为更换酶切位点,以pGEMEX/C-G250肽-C为模板,PCR扩增C-G250肽-C基因片段,最终将目的基因亚克隆入原核表达质粒pET28a(+)中,IPTG诱导融合蛋白表达,利用Ni2+-NTA亲和层析法纯化重组融合蛋白,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达,纯化后融合蛋白经腹腔注射免疫BALB/c小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清中抗体的滴度.结果 酶切及基因测序鉴定证实融合基因正确重组于表达质粒pET28a(+)中,原核表达并纯化后,该分离纯化融合蛋白纯度达95%以上,其相对分子质量约为22.35.BALB/c小鼠经4次免疫后,所有小鼠血清中均可检测到抗体,免疫第6周其血清中抗体滴度可达到1:5.12×105,抗G250肽抗体滴度达到1:6.4×104,抗HBcAg抗体滴度不超过1:4×103.结论 成功构建肾癌G250抗原肽与HBcAg重组基因原核表达质粒pET28a(+)/C-G250肽-C,在大肠杆菌中可高效表达,纯化后融合蛋白具有较强的免疫原性,能诱导小鼠产生高滴度和高特异性的抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨广笑		67	148	5.0	7.0
2	陈杰	山东大学附属济南市中心医院泌尿外科	15	63	5.0	7.0
3	刘波	山东大学医学院	34	255	11.0	14.0
7	孙泽强	山东大学附属济南市中心医院泌尿外科	2	3	1.0	1.0
8	刘庆勇	山东大学附属济南市中心医院泌尿外科	5	11	2.0	2.0
9	王司军	山东大学附属济南市中心医院泌尿外科	2	3	1.0	1.0