人G250真核表达载体pIRES-neo-G250的构建及表达

• 作者: 于继云 张巍 徐元基 朱晓明 李云奇 李盼 王伟 王宇 王琳 肖毅 阎瑾琦 高江平
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: G250 真核表达 质粒 293T细胞 肾肿瘤
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 354-357
• 页数: 4页
• 分类号: R737.11
• 字数: 3394字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2013.05.009

摘要

目的 构建包含人的G250真核表达载体,并将该载体转导入293 T细胞检测其表达,为构建以G250为靶点的肾癌模型提供研究基础.方法 通过聚合酶链反应获得G250基因,将其连接至PMD18T过渡载体,然后克隆到载体pIRES-neo中.把构建后的重组质粒pIRES-neo-G250转染到293 T细胞,用流式细胞仪、免疫荧光和RT-PCR检测其表达.结果 PCR扩增出的G250基因测序正确,酶切鉴定重组质粒pIRES-neo-G250正确,说明质粒构建成功;流式细胞术、免疫荧光和RT-PCT检测结果表明,重组质粒pIRES-neo-G250在293 T细胞中得到表达.结论 该实验成功构建了重组质粒pIRES-neo-G250,并且在293T细胞中能够有效表达,为后续构建转染人G250的基因细胞株工作奠定了基础.