人G250真核表达载体的构建及稳定转染B16细胞系的建立

• 作者: 于继云 任杰 张亮 王伟 肖毅 阎瑾琦 高昆 高江平
• 来源期刊: 军医进修学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: G250 基因表达 小鼠 黑色素瘤 转染
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 604-606
• 分类号: R342
• 字数: 1950字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人G250真核表达载体,建立稳定表达人G250的小鼠黑色素瘤细胞系.方法 采用PCR方法扩增出人G250基因的cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pIRES-neo-sig中,并加入酶切位点和FLAG标签,得到重组表达质粒pIRES-neo-sig-FLAG-G250.利用阳离子脂质体介导法将其稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,经G418加压筛选出阳性克隆.RT-PCR及免疫荧光检测人G250在B16细胞中的表达.结果 经限制性内切酶鉴定及序列分析,pIRES-neo-sig-FLAG-G250重组质粒构建正确,最终建立的表达人G250基因的B16细胞系阳性率接近100%.结论 成功构建了真核表达载体pIRES-neo-sig-FLAG-G250,建立的稳定转染人G250小鼠黑色素瘤细胞系能够高效表达G250基因.该稳定转染细胞系的建立为G250在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了研究基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高江平	解放军总医院泌尿外科	130	819	13.0	22.0
2	王伟	解放军总医院泌尿外科	17	92	6.0	9.0
3	阎瑾琦	军事医学科学院基础医学研究所	25	54	4.0	5.0
4	张亮	军事医学科学院基础医学研究所	21	50	4.0	5.0
5	任杰	解放军总医院泌尿外科	4	3	1.0	1.0
6	肖毅	军事医学科学院基础医学研究所	9	24	2.0	4.0
10	高昆	大连医科大学检验医学院	2	6	1.0	2.0