猪FcγRⅠ真核表达载体的构建及稳定表达细胞系的建立

• 作者: 乔松林 卜丹 史平玲 张改平 王爱萍 祁艳华 肖治军 邬成业
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪FcγRⅠ受体 共转染 Marc-145细胞
• 年，卷（期）: 2010,（7）
• 页码范围: 909-914
• 分类号: S852.4
• 字数: 3737字
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在建立稳定表达猪 FcγR Ⅰ的Mare-145 细胞系.从猪肺泡巨噬细胞中提取总 RNA,应用 RT-PCR 技术获得猪 FcγR Ⅰ和γ链 cDNA,并分别构建 PIREShyg3-γ和 pcDNA3.1-FcγR Ⅰ真核表达质粒;用脂质体共转染 Marc-145 细胞,经潮霉素B(300 μg·mL-1)和G418(400 μg·mL-1)共筛选获得稳定表达猪 FcγR Ⅰ的细胞系;运用 RT-PCR、玫瑰花环和流式细胞术对细胞系进行鉴定.结果表明成功构建了猪 FcγR Ⅰ和γ链真核表达载体,建立了稳定表达猪 FcγR Ⅰ的细胞系,且表达于转染细胞表面的 poFcγR Ⅰ受体分子能与猪 IgG 特异结合.本研究为进一步研究奠定了基础.