miRNA-7真核表达载体的构建与鉴定

• 作者: 任涛 宋永祥 廖珍媛 徐林 李永菊 李颖 秦安东 罗军敏
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: miR-7 真核表达 肺癌 MTT法
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 454-459
• 页数: 6页
• 分类号: R392
• 语种: 中文

摘要

目的 构建miR-7真核表达载体并观察其对人肺癌细胞体外生长的影响.方法 以人肺癌细胞系95D细胞基因组DNA为模板,PCR法扩增miR-7前体序列,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后将其亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),并进行酶切及测序鉴定;将构建成功的pcDNA3.1(-)-pri-miR-7载体(命名为p-miR-7)体外瞬时转染95D细胞,应用Real-time PCR特异探针法检测miR-7成熟体的表达水平,并利用MTT法检测细胞生长的改变.结果 酶切和测序验证成功构建了miR-7真核表达载体p-miR-7;表达载体p-miR-7瞬时转染95D细胞后可有效表达miRNA-7成熟体,并显著抑制95D细胞的体外生长(P<0.05).结论 成功构建了miR-7的真核表达载体,为后续深入研究miR-7在肺癌发生中的作用及机制提供了前期实验基础.