大鼠Smad 7基因真核表达质粒的构建与鉴定

• 作者: 周婷 徐丽红 李睿 杨军 杨小艳 郑勇
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 质粒 DNA结合蛋白质类 肝硬化 克隆 生物 大鼠
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 891-893
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2008.11.019

摘要

目的:构建并鉴定大鼠Smad 7/pcDNA3.1(+)真核表达质粒,为进一步研究Smad 7的抗肝纤维化作用提供实验基础.方法:TRIzol法抽提大鼠肝组织总RNA,琼脂糖凝胶电泳检测其完整性,紫外分光核酸蛋白分析仪测定其浓度与纯度,两步法获取大鼠Smad 7 cDNA片段,CaCl2法制备感受态细胞,应用EcoRl及XhoI在pcDNA3.1(+)多克隆位点处进行双酶切,切胶回收载体及目的片段酶切产物,将回收的线性化pcDNA3.1(+)与Smad 7 cDNA连接,构建Smad 7/pcDNA3.1(+)重组质粒,转化DH5α大肠杆菌,测序鉴定双酶切证实的阳性克隆.结果:电泳检测RNA的完整性良好,28S约为18S的2倍A260/A280=1.986,纯度较好,阳性克隆酶切后电泳检测在DNA Marker 1.3 kb处见Smad 7目的片段,5.4 kb处见线性化pcDNA3.1(+),与预期结果相符,质粒重组成功,并测序证实.结论:大鼠Smad 7真核表达质粒构建成功,为进一步单独或联合其他质粒从TGF-β/SMAD信号传导的不同环节干预肝纤维化提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨小艳	石河子大学医学院第一附属医院老干一科	7	9	2.0	2.0
2	郑勇	石河子大学医学院第一附属医院消化内科	84	323	10.0	14.0
3	杨军	石河子大学医学院第一附属医院中心实验室	28	91	5.0	7.0
4	周婷	石河子大学医学院第一附属医院中心实验室	35	132	8.0	9.0
5	李睿	石河子大学医学院第一附属医院消化内科	21	44	5.0	5.0
6	徐丽红	石河子大学医学院第一附属医院消化内科	20	58	4.0	7.0