hGPx-1-198Leu真核表达载体的构建与鉴定及在H9C2细胞中的表达

• 作者: 朱延河 林琳 牛小麟 王素琴 高登峰
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: GPx-1基因 Pro198Leu多态 真核表达载体 转染 H9C2细胞 硒
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 152-156
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201402003

摘要

目的 构建含有人GPx-1基因Pro198Leu多态的真核表达载体,为深入研究GPx-1基因Pro198Leu多态在相关疾病中的作用与机制提供依据.方法采用全基因合成的方法合成含多态位点的人GPx-1基因cDNA片段,同时在基因5′端和3′端分别引入BamHⅠ和NotⅠ酶切位点,通过限制性内切酶酶切目的 片段和真核表达载体pEGFP-N3,再用T4 DNA连接酶将含有目的 基因的片段定向插入到载体pEGFP-N3真核人巨细胞病毒启动子下游.连接产物转化至DH5α中.挑取克隆、提取质粒进行鉴定.将hGPx-1-198Leu真核表达载体转染HEK293细胞,观察转染效率,并采用RT-PCR检测转染重组载体后细胞中GPx-1的mRNA表达水平.重组载体转染H9C2细胞,观察补硒之后的GPx-1表达情况.结果 获得目的 基因cDNA片段全长869bp,PCR和测序鉴定载体中含有人GPx-1-198Leu基因cDNA.重组载体转染HEK293细胞后检测到GPx-1的mRNA水平比未转染组及空质粒转染组明显升高,为深入研究GPx-1基因Pro198Leu多态在相关疾病中的作用与机制奠定了基础.H9C2细胞在转染后GPx-1蛋白水平升高并且随着硒浓度的升高而升高.结论 成功构建了含Pro198Leu多态位点的hGPx-1真核表达载体,并且也插入了保证该基因有效表达的硒代半胱氨酸插入序列.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	牛小麟	西安交通大学医学院第二附属医院心内科	85	262	8.0	11.0
2	高登峰	西安交通大学医学院第二附属医院心内科	63	318	8.0	16.0
3	王素琴	西安交通大学医学院第二附属医院心内科	13	166	8.0	12.0
4	朱延河	西安交通大学医学院地方病研究所	22	69	5.0	7.0
5	林琳	西安交通大学医学院第二附属医院心内科	13	38	4.0	5.0