人CDK7基因真核表达载体的构建与鉴定

• 作者: 冀全博 史平安 叶棋浓 周丽英 张强 徐小洁 李玲 梁迎春 王岩 王涛 黄蓉
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 细胞周期蛋白质依赖激酶类 基因,p53 真核表达
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 932-935
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 3323字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2014.12.003

摘要

目的：构建带Myc标签的细胞周期蛋白依赖性激酶7（cyclin－dependent kinase 7， CDK7）的真核表达载体，获得其表达产物，并验证该激酶与已知相互作用蛋白P53之间的相互作用。方法应用PCR技术从人乳腺文库中扩增出CDK7全长编码区基因，将其克隆到pXJ－40载体中；继而重组质粒转染人胚肾293 T细胞，以SDS－PAGE和Western印迹鉴定表达情况；免疫共沉淀检测Myc－CDK7与FLAG－p53的相互作用。结果双酶切和基因测序鉴定显示，Myc－CDK7真核表达质粒克隆构建成功；SDS－PAGE和Western印迹结果表明，Myc－CDK7转染人胚肾293T细胞后成功表达；免疫共沉淀显示，重组Myc－CDK7与已知相互作用蛋白P53在蛋白质水平上具有相互作用，证实其具有生物学活性。结论成功构建Myc－CDK7的真核表达载体，为进一步探讨Myc－CDK7对细胞周期的调控奠定了实验基础。