反义HSP70真核表达载体的构建和在人喉癌细胞的表达

• 作者: 付员根 刘志国 刘晖 姚小宝 宁小萱 朱宏亮 李胜利 樊代明 王晓侠
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 热休克蛋白70 真核表达载体 构建 喉癌 表达
• 年，卷（期）: 2002,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 344-347，413
• 页数: 5页
• 分类号: R733.71
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8259.2002.04.006

摘要

目的进行促凋亡治疗喉癌实验,构建和鉴定携带反义HSP70(heat shock protein 70)基因的真核表达载体.方法将HSP70 cDNA反向克隆入pcDNA 3.1,构建CMV启动子控制的真核表达载体pcDNA-AHSP70,用酶切鉴定结果;应用该载体转染人喉表皮样癌细胞Hep-2,G418筛选阳性克隆;western blot和免疫组化检测转染前后瘤细胞的HSP70的表达.检测转染前后瘤细胞的生物学性状.结果获得pcDNA-AHSP70真核表达载体,HSP70反义RNA阻断了Hep-2细胞的HSP70的表达,经western blotting和免疫组化证实,实验组瘤细胞不能表达或低表达HSP70,而对照和空载体组高表达HSP70.转染反义HSP70的真核表达载体的Hep-2细胞比空载体组和对照组的细胞生长缓慢,细胞周期可见实验组出现亚二倍凋亡峰,而空载体组没有.结论本研究成功构建了反义HSP70真核表达载体并在人喉癌细胞得以表达.