小鼠Collectrin正反义真核表达载体的构建及其功能

• 作者: 侯平 张宏 张艳玲 李寒 王海燕 王湘玲
• 来源期刊: 北京大学学报医学版
• 关键词: Collectrin 基因表达 肾小管,集合 细胞分裂
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 181-184
• 页数: 4页
• 分类号: R692.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1671-167X.2004.02.016

摘要

目的:构建新基因Collectrin的正反义真核表达载体,研究其与细胞生长的关系.方法:以PCR的方法扩增Collectrin的开放阅读框序列,与载体pcDNA3.1/V5-His相连构成融合基因表达质粒.将重组后的质粒进行细菌转化,质粒扩增、纯化后,测序鉴定Collectrin的正义及反义序列.以脂质体介导的方法体外转染肾皮质集合管细胞系(M-1).以β-Gal staining的方法测定转染效率.分别行逆转录-PCR和Western blot,检测不同融合基因转染后细胞Collectrin mRNA和蛋白水平的表达变化.以四甲基偶氮唑蓝(MTF)参入法分别在第24小时、第48小时测定不同融合基因转染后细胞增殖活性.结果:M-1细胞在融合基因转染第24小时转染效率最高.Collectrin正义转染组较反义、空载体和正常对照组在核酸和蛋白水平表达量都显著增高,Collectrin反义转染组蛋白表达较其他组明显下调.反义转染组细胞较其他组明显减少.结论:成功构建了Collectrin正义及反义真核表达载体,Collectrin是维持细胞生长存活的重要元件.