CYP2C19基因多态性真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立

• 作者: 俞竟 吴兰香 周宏灏 屈强 张伟 李智 温纯洁 陈旺
• 来源期刊: 中国临床药理学与治疗学
• 关键词: CYP2C19 基因多态性 真核表达 转染
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 263-268
• 分类号: R965.2
• 语种: 中文

摘要

目的:构建细胞色素P450 CYP2C19*1、*2、*3真核表达载体,并分别转染人肝癌细胞(HepG2),建立高表达目的基因的稳定转染细胞系.方法:应用化学合成法合成CYP2C19*1(野生型)序列,再以此为模板,体外定点突变PCR法构建*2、*3(突变型).DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(-),经菌落PCR、酶切以及测序鉴定后,脂质体转染法转染HepG2细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,RT-PCR、Western Blot分别检测CYP2C19*1、*2、*3 mRNA以及蛋白的表达.结果:成功构建了pcDNA3.1(-)-CYP2C19*1、*2、*3表达质粒,并建立了相应稳定转染细胞系.进一步的RT-PCR和Western Blot检测结果表明,目的基因均得到了稳定的表达.结论:人CYP2C19*1、*2、*3稳定表达细胞系为研究创新药物或新药先导化合物临床前代谢性质的筛选和预测以及为临床潜在药物相互作用提供了有效实验平台.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张伟	中南大学临床药理研究所	190	1554	21.0	30.0
2	李智	中南大学临床药理研究所	50	524	13.0	21.0
3	陈旺	重庆医科大学生命科学研究院	2	4	1.0	2.0
4	俞竟	中南大学临床药理研究所	1	0	0.0	0.0
5	屈强	中南大学临床药理研究所	9	42	4.0	6.0
6	吴兰香	重庆医科大学生命科学研究院	13	25	3.0	4.0
7	温纯洁	重庆医科大学生命科学研究院	12	31	3.0	5.0
8	周宏灏	重庆医科大学生命科学研究院	14	39	4.0	6.0